한눈에 보기, 적절하게 정제된 RNA는 일반적으로 알려진 것보다 훨씬 더 안정적입니다. 효소 오염이 없다면 추출된 RNA는 실온에서 최대 2일, 4°C에서 2주 동안 보관할 수 있으며, -20°C 또는 -80°C에서 보관할 경우 측정 가능한 분해 없이 최대 10회의 동결-해동 주기를 견딜 수 있습니다.
RNA 보관의 핵심 원칙은 RNA 분자 자체의 고유한 취약성이 아니라 RNase 효소를 효과적으로 비활성화하는 것입니다. 온도는 이러한 파괴적인 효소의 활성을 제어하는 데 사용하는 도구일 뿐입니다.
RNA 무결성에 대한 진정한 위협: RNase
RNA가 극도로 취약하다는 일반적인 통념은 단 하나의 원인, 즉 리보뉴클레아제(RNase)에 뿌리를 둔 실질적인 진실입니다. RNase를 제어하는 방법을 이해하는 것이 샘플 보존의 열쇠입니다.
RNase란 무엇인가요?
RNase는 RNA를 분해하는 데 특화된 효소입니다. 이들은 악명 높게 안정적이며, 보조 인자가 필요 없고, 손, 먼지 입자, 인증되지 않은 실험 장비를 포함하여 거의 모든 표면에 존재합니다.
정제된 RNA 샘플에 미량의 RNase라도 존재하는 것이 분해의 주된 원인입니다.
온도가 RNase 활성을 제어하는 방법
RNA를 저온에 보관하는 것은 RNase를 파괴하는 것이 아니라 단순히 그 활동을 늦추거나 비활성화시키는 것입니다.
- 실온에서는 활성 RNase가 RNA를 빠르게 분해합니다.
- 4°C에서는 효소 활성이 상당히 감소하지만 멈추지는 않습니다.
- -20°C 및 -80°C에서는 효소 활성이 효과적으로 동결되어, 계속 냉동 상태를 유지하는 한 RNA는 무기한 보존됩니다.
이것이 보관 기간이 온도와 직접적으로 연결되는 이유입니다. 이는 잠재적인 오염 RNase가 심각한 손상을 입히는 데 걸리는 시간을 측정하는 것입니다.
RNA 보관을 위한 실용 가이드
RNA의 안정성은 추출 중 핵산분해효소 비활성 취급 절차를 따랐다고 가정할 때, 의도한 기간에 대해 올바른 온도를 사용하는지에 전적으로 달려 있습니다.
장기 보관(-80°C)
몇 달 이상 보관하거나 매우 귀중한 샘플의 경우, -80°C가 황금 표준입니다. 이 온도에서는 모든 효소 및 거의 모든 화학적 과정이 중단되어 몇 년 동안 샘플 무결성을 보장합니다.
중기 보관(-20°C)
일반적인 작업 및 최대 몇 달 보관의 경우, -20°C가 완벽하게 적합합니다. 이 기간 동안 안정성은 -80°C와 비슷하므로 대부분의 실험실에서 실용적인 선택입니다.
단기 실험 사용(4°C)
RNA를 얼음 위에 또는 4°C 냉장고에 최대 14일 동안 분해 없이 안심하고 보관할 수 있습니다. 이는 일주일 또는 2주 동안 일련의 실험에 샘플을 적극적으로 사용할 때 이상적입니다. 증발을 방지하기 위해 밀봉된 튜브를 사용해야 합니다.
즉각적인 벤치탑 작업(실온)
순수한 RNA는 깨끗한 실험대 위 실온에서 최대 2일 동안 안정적입니다. 이는 샘플을 계속 얼음에 보관할 필요 없이 역전사 또는 qPCR 플레이트 설정과 같은 다운스트림 응용을 수행할 수 있는 안전한 기간을 제공합니다.
상충 관계 및 모범 사례 이해
단순히 온도를 선택하는 것만으로는 충분하지 않습니다. 추출 프로토콜로 확립된 품질을 유지하려면 적절한 취급 전략이 필수적입니다.
동결-해동 주기의 위험성
냉동 RNA에 대한 가장 큰 위험은 보관 자체가 아니라 해동 및 재동결 과정입니다. 10회의 동결-해동 주기에 대한 언급은 중요한 한계입니다.
각 주기는 비활성 상태의 RNase가 활성화될 수 있는 짧은 창을 제공합니다. 한두 번의 주기는 문제가 될 가능성이 낮지만, 반복적인 주기는 필연적으로 샘플 분해로 이어집니다.
분주(Aliquot)의 중요성
RNA를 보호하는 가장 좋은 단일 방법은 추출 직후 샘플을 분주하는 것입니다.
마스터 샘플을 여러 개의 작은 일회용 튜브에 보관하면 모든 실험을 위해 전체 스톡을 해동할 필요가 없어집니다. 이는 동결-해동 주기로 인한 손상을 완전히 방지하고 메인 샘플의 무결성을 보존합니다.
물 대 버퍼 보관
핵산분해효소 비활성 물이 일반적이지만, TE(Tris-EDTA)와 같은 약한 버퍼에 RNA를 보관하면 추가적인 보호를 제공할 수 있습니다. 버퍼 내의 EDTA는 일부 RNase가 활성을 위해 필요로 하는 이가 양이온을 킬레이트하여 잔류 오염에 대한 보안 계층을 추가합니다.
목표에 맞는 올바른 선택하기
보관 전략은 실험 계획과 샘플의 가치에 따라 결정되어야 합니다.
- 장기 보관 또는 귀중한 참조 샘플 생성이 주된 목표인 경우: RNA를 버퍼 용액에 담아 -80°C에서 일회용 튜브에 분주하여 보관하십시오.
- 몇 주 또는 몇 달에 걸친 일상적인 분석이 주된 목표인 경우: -20°C에 분주물을 보관하는 것은 보안과 접근성 사이의 실용적인 균형을 제공합니다.
- 며칠 이내의 즉각적인 처리가 주된 목표인 경우: 초기 추출이 순수하고 핵산분해효소 비활성 생성물을 산출했다면, 샘플을 4°C 또는 심지어 실온에 보관하는 것이 안전합니다.
궁극적으로, 귀하의 취급 기술과 엄격한 핵산분해효소 비활성 워크플로우는 특정 냉동고 온도보다 RNA 보존에 훨씬 더 중요합니다.
요약표:
| 온도 | 최대 권장 보관 시간 | 주요 고려 사항 |
|---|---|---|
| 실온 | 최대 2일 | 즉각적인 벤치탑 작업에 안전함 |
| 4°C | 최대 2주 | 단기 실험 사용에 이상적 |
| -20°C | 몇 달 | 일상적인 작업 및 중기 보관에 적합 |
| -80°C | 수년 (장기 보관) | 귀중한 샘플을 위한 황금 표준 |
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